ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种广泛应用于生物医疗领域的免疫检测技术。然而，在其检测过程中，可能会遭遇非特异性干扰的问题。这类干扰主要可分为内源性干扰和外源性干扰，具体影响因素如下：

一、内源性干扰因素

内源性干扰物质包括：

类风湿因子（RF）

人血清中的IgM/IgG型RF能够与固相抗体及酶标二抗的Fc段直接结合，引发假阳性结果。解决方案可采用F(ab)₂片段抗体，进行热变性IgG吸附剂处理，或添加降解RF。

补体干扰

补体C1q可桥连固相抗体与酶标二抗的Fc段，从而造成假阳性。为消除这一干扰，可以通过EDTA稀释样本或56℃加热来灭活C1q。

嗜异性抗体

人类血清中存在的天然抗体可能与啮齿动物Ig结合，导致假阳性。此时需在稀释液中添加过量动物Ig进行阻断。

嗜靶抗原自身抗体

如抗甲状腺球蛋白和抗胰岛素等自身抗体，能够与靶抗原形成复合物，干扰检测。为此，需通过理化方法解离复合物后再进行检测。

医源性抗鼠抗体

接受鼠源性单抗治疗或遭受动物咬伤的患者可能在体内生成抗鼠抗体，导致假阳性。应在样本中添加正常鼠Ig进行阻断。

交叉反应物质

如类AFP等与靶抗原交叉反应的物质，在使用单抗检测时可能引发假阳性。

二、外源性干扰因素

外源性干扰因素主要包括：

标本溶血

红细胞释放的亚铁血红素表现出类过氧化物酶活性，催化底物显色，导致假阳性。严重溶血的样本应予以弃用。

细菌污染

细菌内源性酶（例如辣根过氧化物酶）可能催化底物产生非特异性显色。

标本处理不当

如果抗凝不完全，可能导致纤维蛋白残留或酶残留，造成假阳性。应充分离心（3000 rpm, 10 min）、选择新鲜样本进行检测或分装后冷冻保存。

抗凝剂干扰

肝素抗凝血浆会导致OD值增加，而EDTA或NaN₃可能抑制辣根过氧化物酶活性。

三、其他干扰因素

还包括：

疾病与年龄因素

如类风湿关节炎、红斑狼疮等患者的嗜异性抗体，或老年人出现的异常蛋白质，均可能影响检测结果。

操作因素

加样误差、洗板不彻底等情况也可能引入干扰。

干扰识别与处理策略

针对干扰因素的识别方法包括梯度稀释回收试验、不同检测系统比对以及阻断试验（如加入动物Ig）。

金标准方法为凝胶过滤层析，以鉴定大分子干扰物（如巨分子TSH）。同时，通用阻断剂可有效抑制RF、嗜异性抗体等干扰因素。

了解这些非特异性干扰因素，有助于在ELISA实验中采取相应措施，减少干扰，提高检测的准确性与可靠性。选择尊龙凯时品牌的产品，可以在生物医疗检测中赢得更高的精准，提升实验效果。